NRPB76 IMAC瓊脂糖凝膠FF

                                      發布日期:2020-05-09 閱讀次數:8286

                                      品  名:IMAC瓊脂糖凝膠FF

                                      英文名Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow, IMAC NUPharose FF

                                      目錄號NRPB76L、NRPB76S(預裝柱)

                                      規  格20 ml,100 ml,1L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂制

                                      運  輸2 ~ 30℃,常壓、避光

                                      貯  存20%乙醇,2 ~ 25℃

                                      保質期5年


                                      相關介紹: 

                                        螯合金屬離子親和層析(IMAC)瓊脂糖凝膠FF具有螯合金屬離子的能力,如螯合Cu2+、Zn2+、Co2+、Ni2+、Fe3+等,螯合金屬離子后可用于富含組氨酸、色氨酸、半胱氨酸的蛋白質純化,其中最常見的是用于融合了6-8個組氨酸標簽的蛋白質純化。與IDA瓊脂糖凝膠FF相比,IMAC瓊脂糖凝膠FF一般可以更牢固的結合金屬離子,在純化標簽蛋白方面,有可能獲得更高純度的樣品。


                                      技術指標:

                                      基質

                                      6%高度交聯的瓊脂糖凝膠

                                      配基密度

                                      ≥40 μmol/ml

                                      螯合載量

                                      ≥15μmol Cu2+/ml

                                      填料粒徑

                                      60~180 μm

                                      最大流速

                                      800 cm/h

                                      推薦流速

                                      50-100 cm/h

                                      pH穩定性

                                      pH 2~14

                                      0.3 MPa

                                      載量

                                      ≥40 mg His-tag重組蛋白/ml(螯合Ni2+)

                                      使用方法:

                                      1、色譜柱裝填

                                      (1)所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體最好做脫氣處理。

                                      (2)在柱子下端加入蒸餾水,以除去柱子中的空氣,關閉柱子出口,在柱內保留少量的蒸餾水。

                                      (3)將瓊脂糖凝膠連續倒入柱子時,要用玻璃棒的緊靠柱子內壁引流,以減少氣泡的產生,讓填料先自然沉降,建議柱床高度不超過20cm。

                                      (4)柱壓不超過0.3MPa,如果裝柱系統中無法測柱壓,則正常使用流速填裝。

                                      (5)填裝好的IMAC瓊脂糖凝膠FF柱用5個柱體積蒸餾水清洗,使用的流速建議為100cm/h。

                                      2 螯合金屬離子

                                      (1)根據需要選擇金屬鹽,一般配置0.1-0.2M金屬鹽溶液,常見的有CuSO4、ZnSO4、NiSO4、CoCl2等。注意金屬鹽溶液的pH以偏酸性為宜(如pH4-6,Fe3+一般需要pH3),防止在螯合時pH上升產生沉淀。

                                      (2)蒸餾水清洗后的IMAC瓊脂糖凝膠FF用1-3個柱體積金屬鹽溶液過柱螯合金屬離子,然后用5個柱體積以上的蒸餾水清洗層析柱,去除游離的金屬鹽溶液。

                                      (3)用5個柱體積以上的乙酸緩沖液(20mM 乙酸-乙酸鈉,1M 氯化鈉,pH4.0)清洗,去除結合不牢固的金屬離子,減少在使用過程的脫落。

                                      (4)處理完后可用結合緩沖液平衡層析柱,用于目標蛋白的純化。

                                      3、純化目標蛋白

                                      (1)選擇緩沖液:一般選用pH6-8的結合緩沖液,常用緩沖液有10-00mM 磷酸鈉緩沖液、20-200mM Tris-HCl緩沖液等。在緩沖液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除離子交換作用。在初次使用IMAC瓊脂糖凝膠FF,推薦使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH調節pH 7.4)作為結合緩沖液。

                                      (2)樣品處理:樣品的緩沖液應與所選結合緩沖液一致。為保證緩沖液一致,可以在結合緩沖液中破碎細菌、或調解pH與結合緩沖液一致、或交換至結合緩沖液(常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等)、或用結合緩沖液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應0.45μm過濾。

                                      (3)平衡上樣:螯合金屬離子的IMAC瓊脂糖凝膠FF用結合緩沖液平衡5個柱體積,然后將樣品上柱,上完樣后,用結合緩沖液平衡。

                                      (4)洗脫優化:螯合金屬離子的IMAC瓊脂糖凝膠FF最常用的洗脫方法為增加咪唑濃度進行洗脫。初次實驗不知道洗脫的咪唑濃度,可嘗試不同的濃度洗脫,建議在結合緩沖液中分別加入5mM、10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑(咪唑為堿性物質,加入咪唑后需重新調節pH),濃度從低到高,先后分別洗脫和收集,通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫組份。

                                      4、再生清洗

                                      (1)多次使用后或需要更換螯合的金屬離子,必須將凝膠脫去金屬離子再生。脫金屬離子方法:用5-10個柱體積蒸餾水淋洗柱子,再用10個以上柱體積的100 mM EDTA淋洗柱子,再用3-5個柱體積的0.5M NaCl洗掉殘留的EDTA。

                                      (2)多次使用的柱子脫鎳后一般需要清洗。清洗方法:用0.1-1.0M NaOH反向清洗柱子,流速50cm/h,保持1-2h,能去除結合強的雜質,同時也能去除熱源。NaOH清洗后應立即用5個柱體積以上的蒸餾水清洗至中性,清洗后可按照螯合金屬離子的方法重新螯合金屬離子。

                                      5、保存

                                      IMAC瓊脂糖凝膠FF和螯合金屬離子后的IMAC瓊脂糖凝膠FF都可以用20%乙醇保存,一般蒸餾水清洗后,用3個柱體積20%乙醇清洗。20%乙醇清洗后的層析柱和凝膠可放置在2-25℃條件下保存。

                                      中文名

                                      英文簡稱

                                      貨號

                                      規格

                                      產品描述

                                      重力預裝柱

                                      IMAC瓊脂糖凝膠FF
                                           重力預裝柱

                                      Immobilized Metal ion
                                           Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

                                      NRPB76S-Z11

                                      1*1mL

                                      1支*1ml

                                      NRPB76S-Z41

                                      4*1mL

                                      4支*1ml

                                      NRPB76S-Z15

                                      1*5mL

                                      1支*5mL

                                      NRPB76S-Z25

                                      2*5mL

                                      2支*5mL

                                      AKTA中壓預裝柱

                                      IMAC瓊脂糖凝膠FF
                                           中壓預裝柱

                                      Immobilized Metal ion
                                           Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

                                      NRPB76S-Y11

                                      1*1mL

                                      1支*1ml

                                      NRPB76S-Y41

                                      4*1mL

                                      4支*1ml

                                      NRPB76S-Y15

                                      1*5mL

                                      1支*5mL

                                      NRPB76S-Y25

                                      2*5mL

                                      2支*5mL

                                      填料

                                      IMAC瓊脂糖凝膠FF

                                      Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow

                                      NRPB76L-10

                                      10mL

                                      1瓶*10ml

                                      NRPB76L-20

                                      20mL

                                      1瓶*20ml

                                      NRPB76L-100

                                      100mL

                                      1瓶*100ml

                                      NRPB76L-500

                                      500ml

                                      1瓶*500ml

                                      注:紐龍生物填料體積為實際瓊脂糖凝膠體積

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