NRPA37 重組BirA生物素連接酶(CBD標簽)(rC-BirA)

                                      發布日期:2020-05-09 閱讀次數:9711

                                      品    名:重組BirA生物素連接酶(CBD標簽)(Recombinant BirA Biotin Ligase, CBD-tag; rC-BirA)

                                      目 錄 號:NRPA37S

                                      規    格:100μg,1 mg,10 mg

                                      產品形式:凍干粉,凍干前溶液為10mM Tris-HCl, pH8.0溶液

                                      分 子 量:44.5kDa

                                      等 電 點:7.14

                                      活    性:≥4000 U/mg

                                      純    度:≥95%(SDS-PAGE檢測)

                                      濃度測定:280nm吸收法,摩爾吸光系數為6.85×104(mol/L)-1·cm-1,即c(g/L) = A280nm/1.54

                                      內 毒 素:≤5EU/mg

                                      來    源:大腸桿菌

                                      保存條件:-20℃保存

                                      有 效 期:3年


                                      相關介紹:

                                        BirA生物素連接酶由大腸桿菌中的BirA基因編譯表達,可用于特定蛋白質的生物素化反應,通過該酶的催化反應可將生物素共價連接到特定的蛋白質上。特定的蛋白質指含有AviTag的標簽蛋白,可通過基因工程方式獲得,AviTag一般由15個氨基酸殘基組成的小標簽(GLNDIFEAQKIEWHE),可以與目標蛋白的N端或C端融合,融合了AviTag的蛋白在BirA催化作用下,可將生物素共價連接到該標簽中的賴氨酸上,實現定向生物素化。

                                        重組BirA生物素連接酶(CBD標簽)由BirA基因與CBDtag、HisTag融合表達,并高度純化,具有高活性、高效率、高純度、高穩定性的特點,可用于含AviTag重組蛋白的體外生物素化。

                                        反應體系:50mM Bicine緩沖液,pH8.3,10mM ATP,10mM MgSO4,50μM生物素,40μM AviTag重組蛋白,10μg/ml rC-BirA,可參考下表加入各組分,30℃反應30min。也可以在其他溫度反應,如室溫25℃反應1-4h,或4℃反應過夜,不同的蛋白可能存在反應速率不一樣的情況,可適當調節酶量,以獲得更好的反應效果。除Bicine緩沖液外,其它緩沖液也可用于反應,如20mM Tris-HCl等,有些試劑會降低該酶的催化活性,如NaCl、甘油、硫酸銨、β-巰基乙醇等,應盡量降低樣品中這些試劑的含量。反應結束后的樣品可以通過透析、超濾、凝膠過濾等方式去除試劑,如需純化可用我司的ee-Streptavidin NUPharose FF可逆親和層析進行純化,特異性純化生物素化蛋白。

                                      表1 rC-BirA催化AviTag重組蛋白生物素化參考反應體系

                                      組分

                                      體積

                                      Buffer A: 500mM Bicine緩沖液,pH3.3

                                      0.1ml

                                      Buffer B: 100mM ATP,100mM MgSO4,500μM生物素

                                      0.1ml

                                      80μM AviTag重組蛋白

                                      0.5ml

                                      100μg/ml rC-BirA溶液

                                      0.1ml

                                      蒸餾水

                                      0.2ml

                                      總體積

                                      1.0ml

                                      活性定義:在上述反應條件下,30℃、30min催化1nmol AviTag重組蛋白生物素化所需的酶量為1U。

                                      圖片1.jpg

                                      M:蛋白質分子量標準

                                      Lane 1:rC-BirA

                                      注意:本產品僅限于科研使用。


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