NRPB06L 重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                                      發布日期:2018-10-27 閱讀次數:9001

                                      品  名:耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                                      英文名:Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF

                                      目錄號:NRPB06L、NRPB06S(預裝柱)

                                      規  格:20 ml,100 ml,1 L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂制

                                      運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

                                      貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

                                      保質期:3年


                                      相關介紹: 

                                      耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF與普通的蛋白A瓊脂糖凝膠相比,主要提高了凝膠的耐堿性,可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除熱源。在骨架與重組耐堿蛋白A鍵合上分別設計了延伸碳臂和定向結合位點,保證了重組耐堿蛋白A與骨架的定向牢固鍵合,以及與抗體的高效親和。


                                      技術指標:

                                      基質

                                      4%高度交聯瓊脂糖凝膠

                                      配基

                                      重組耐堿蛋白A

                                      配基密度

                                      ≥6 mg/ml

                                      填料粒徑

                                      60 ~ 180 μm

                                      最大流速

                                      800 cm/h

                                      推薦流速

                                      20 ~ 100 cm/h

                                      工作(清洗)pH

                                      3 ~ 11(2 ~ 13)

                                      耐反壓

                                      0.3 MPa

                                      載量

                                      ≥40 mg/ml IgG


                                      產品特點:

                                      1)配基脫落:約1~7 ng rat-PA/mg IgG,配套的rat-PA試劑盒(NRPB53S)檢測多次使用的洗脫液中殘留rat-PA含量

                                      2)耐堿性

                                      在25℃的條件下,將rat-PA浸在不同濃度的NaOH溶液中:

                                      0.1 M 處理72 h載量維持在90%以上;

                                      0.5 M處理16 h在80%以上,處理36 h在50%以上;

                                      1.0 M處理4 h在90%以上,處理8 h在50%以上。

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                                      3)耐酸性

                                      在25℃的條件下,將rat-PA浸在不同pH的酸溶液中:

                                      pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 處理6天載量均維持在90%以上

                                      0.5 M HCl處理2天載量在80%以上,處理6天在50%以上 


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                                      4)耐壓性

                                      儀器:AKTA explorer 100

                                      柱子:1.0 cm×30 cm

                                      流速:每30 s增加0.5 ml/min

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                                      5)使用壽命

                                      200次循環純化牛血清中IgG,每次使用0.1 M NaOH處理15 min,200次使用后未發現明顯的載量損失。

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                                      應用舉例:

                                      結合緩沖液:20 mM磷酸緩沖液,150 mM NaCl,pH 7.4

                                      洗脫緩沖液:0.1 M檸檬酸緩沖液,pH 4.0

                                      中和緩沖液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

                                      1)1 ml耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

                                      2)用結合緩沖液結合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積;

                                      3)將5 ml兔多抗血清用結合緩沖液稀釋到50 ml,0.45 μm濾膜過濾上樣;

                                      4)用結合緩沖液再洗 5 ~ 10個柱床體積;

                                      5)用洗脫緩沖液洗脫抗體,收集洗脫峰,并用中和緩沖液調節其pH至中性;

                                      6)每次使用后用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M NaOH溶液再生清洗;

                                      7)SDS-PAGE(圖1)電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

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                                      圖 1


                                      注意事項:

                                      1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

                                      2)樣品洗脫后一般pH很低,應立即用堿性中和緩沖液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液),以利于維持抗體的生物活性,避免抗體失活。

                                      3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子。

                                      4)使用后應進行在位清洗,一般建議用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3個柱體積(10 ~ 30 min),立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上。

                                      5)更高要求(消毒、去內毒素、超牢固蛋白殘留等)的在位清洗,可以先用含還原劑(如100 mM DTT、β-ME或1-巰基甘油)的平衡緩沖液清洗3 ~ 5個柱體積,再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5個柱體積(10 ~ 30 min),然后用無菌無內毒素的平衡緩沖液清洗5個柱體積以上。

                                      6)雖然本產品具有較好的堿耐受性,但長期使用較高的NaOH濃度(如0.5 mol/L)清洗仍會縮短使用壽命,建議每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次,每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。

                                      7)為了更好的保護填料,應避免強烈的pH變化,建議酸性洗脫目的抗體后,用平衡緩沖液恢復至中性,再進行NaOH清洗。

                                      8)本產品具有極低的配基脫落率(<10 ng/mg IgG),結合耐堿特性,特別適用于單克隆抗體的生產。但實驗發現長期儲存后首次使用配基脫落率會比較高,建議長期儲存后的首次使用,先用酸性洗脫液清洗3 ~ 5個柱體積,再用平衡緩沖液平衡和樣品純化。

                                      推薦流速

                                      預裝柱體積 1 ml 5 ml 10 ml

                                      流速(ml /min ) 0.2 1 2

                                      9)


                                      推薦流速

                                      預裝柱體積

                                      1 ml

                                      5 ml

                                      10 ml

                                      流速(ml /min )

                                      0.2

                                      1

                                      2

                                      導購指南

                                      中文名

                                      英文簡稱

                                      貨號

                                      規格

                                      產品描述

                                      重力預裝柱

                                      重組耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF重力預裝柱

                                      rat-PA  NUPharose FF pre-packed column

                                      NRPB06S-Z11

                                      1*1mL

                                      1支*1ml

                                      NRPB06S-Z41

                                      4*1mL

                                      4支*1ml

                                      NRPB06S-Z15

                                      1*5mL

                                      1*5mL

                                      NRPB06S-Z25

                                      2*5mL

                                      2支*5mL

                                      AKTA中壓預裝柱

                                      重組耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF中壓預裝柱

                                      rat-PA  NUPharose FF pre-packed column

                                      NRPB06S-Y11

                                      1*1mL

                                      1支*1ml

                                      NRPB06S-Y41

                                      4*1mL

                                      4支*1ml

                                      NRPB06S-Y15

                                      1*5mL

                                      1*5mL

                                      NRPB06S-Y25

                                      2*5mL

                                      2支*5mL

                                      填料

                                      重組耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                                      rat-PA  NUPharose FF

                                      NRPB06L-10

                                      10mL

                                      1瓶*10ml

                                      NRPB06L-20

                                      20mL

                                      1瓶*20ml

                                      NRPB06L-100

                                      100mL

                                      1瓶*100ml

                                      NRPB06L-500

                                      500ml

                                      1瓶*500ml

                                      注:紐龍生物填料體積為實際瓊脂糖凝膠體積



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